BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書(微量法)

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定，確保蛋白濃度在20-2000μg/ml內。

產品內容：

試劑A：液體 20ml×1瓶，4℃保存。

試劑B：液體 1ml×1支，4℃保存。

標準品0.5mg/mL：液體1ml×1支，-20℃保存。

產品說明：

樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。測定原理： 堿性條件下，蛋白質中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與Cu+結合，生成紫色絡合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰最強。

自備儀器和用品：

臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。

工作液配制：臨用前請根據擬用工作液體積（樣本數×0.2mL），將試劑A和B按照50：1的比例混合，蓋緊后充分混勻。

操作步驟：

一、樣品中可溶性蛋白質提?。?/span>

1.  液體樣品：澄清液體樣品可以直接測定。

2.  組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水），冰浴勻漿， 10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）

3.  細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

二、測定操作：

1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到562 nm，蒸餾水調零。

2. 工作液置于60℃水浴預熱30 min。

混勻后置于60℃保溫30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm處測定吸光值A，分別記為A空白管、A標準管、A測定管。

注意：空白管和標準管只需要做一次。

三、計算公式：

Cpr (mg/mL)= C標準品×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）=0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）
注意事項：
1.  BCA 法蛋白含量測定試劑盒，適用于測定蛋白濃度在20-2000μg/ml 樣品。測定前取1-2 個樣做預實驗，樣品蛋白含量太高的話，請稀釋至相應濃度范圍內，以確保測定的準確性。
2.  待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、蒸餾水或PBS 提取。
3.  由于受測定溫度及時間等的影響，請嚴格按照給定條件測定。