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產品名稱:ATP-檸檬酸裂解酶(ACL)測試盒

產品規格:50管/48樣,100管/96樣

產品貨號:ACL-2-Y,ACL-1-Y

產品報價:

免費咨詢:0551-66107970

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貨號

產品名稱

檢測方法

規格

售價(元)

ACL-2-Y

ATP-檸檬酸裂解酶(ACL)測試盒

可見分光光度法

50/48

1500

ACL-1-Y

ATP-檸檬酸裂解酶(ACL)測試盒

微量法

100管/96

2800

ATP-檸檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,ACL)試劑盒說明書(可見分光光度法

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

ACL(EC4.1.3.8)是脂肪酸合成中的關鍵酶,其催化產生的乙酰輔酶 A 可用于脂肪酸合成和碳鏈延長、黃酮類物質合成、氨基酸合成等。

測定原理:

ACL ATP 和輔酶 A 存在的情況下催化檸檬酸裂解為乙酰輔酶 A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和 NADH 生成蘋果酸和 NAD+,在 340nm 測 NADH 減少速率,計算 ACL 活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配制:

提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存; 

試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存; 

試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存;

試劑三:液體 5μL×1 支,4℃保存;

樣本的前處理:

1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 340nm,蒸餾水調零。

2、 樣本測定

(1) 工作液的配置,將試劑二和試劑三轉移至試劑一中,充分混合溶解,置于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 5min;(注意:可取少量試劑一至試劑二和試劑三中,充分混勻溶解后轉移至試劑一瓶中,重復 2-3 遍);用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。

(2)  1mL 石英比色皿中加入 50μL 樣本和 950μL 工作液,混勻,立即記錄 340nm  20s

時的吸光值 A1 2min20s 后的吸光值 A2,計算 ΔA=A1-A2。

ACL 活性計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)ACL 活力計算

單位定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=1608×ΔA 

2、組織、細菌或細胞中 ACL 活力計算

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

單位定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1608×ΔA÷W

(3)按細菌或細胞密度計算:

單位定義:每 1 萬個細胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。

ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=3.216×ΔA

      V 反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADH 摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d 比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T 反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。


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