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產品名稱:抗壞血酸過氧化物酶(APX)測試盒

產品規格:50管/48樣,100管/96樣

產品貨號:YX-C-A304,YX-W-A304

產品報價:

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貨號

產品名稱

檢測方法

規格

售價(元)

YX-C-A304

抗壞血酸過氧化物酶(APX)測試盒

紫外分光光度法

50/48

580

YX-W-A304

抗壞血酸過氧化物酶(APX)測試盒

微量法

100管/96

1100

抗壞血酸過氧化物酶(APX)活性測定試劑盒說明書(微量法

注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

規格:100T/96S

產品內容:

試劑一:液體 120mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加 3 mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三:液體 3mL×1 瓶,4℃保存。

產品說明:

APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一,也是抗壞血酸代謝的關鍵酶之一。APX 具有多種同功酶,分別定位于葉綠體、胞質、線粒體、過氧化物和乙醛酸體,以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA,是植 AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影響到AsA 的含量,APX AsA 具有一定的負相關性。

APX 催化催化H2O2 氧化AsA,通過測定AsA 氧化速率,來計算得APX 活性。

自備儀器用品:

低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>

稱取約0.1g 樣品,加1 mL 試劑一,冰上充分研磨,13000g   4℃離心20min,取上清液。

二、測定:

1、分光光度計/酶標儀預熱30 min 以上,調節波長到 290 nm,用蒸餾水調零。

2、試劑一在25℃中預熱30min 以上。

3、空白管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 蒸餾水、140μL 預熱的試劑一、20μL 試劑二和20μL 試劑三,迅速混勻后在 290nm 測定10s 和130s 光吸收A1 A2,△A 空白管=A1-A2。

4、測定管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 20μL 上清液、140μL 預熱的試劑一、20μL 試劑二和 20μL 試劑三,迅速混勻后在 290nm 測定 10s 和130s 光吸收A3 和A4,△A 測定管=A3-A4。

 三、APX 活性計算:

使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1按蛋白濃度計算

活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol AsA 為1U。

APX(U/mg prot) = (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×106÷(Cpr×V 樣)÷T

=1.79×(△A 測定管-△A 空白管) ÷Cpr

2按樣本鮮重計算

活性單位定義:每克樣品每分鐘氧化 1μmol AsA 為1U。

APX(U/g 鮮重) = (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×106÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T

=1.79×(△A 測定管-△A 空白管) ÷W

ε:AsA 在290nm 處摩爾吸光系數為 2.8×103  L/mol/cm;d:比色皿光徑(cm),1 cm;V 反總:反應體系總體積(L),200μL=2×10-4  L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA 蛋白質含量測定試劑盒;W :樣品質量,g;V 樣:加入反應體系中上清液體積(mL),20μL=0.02mL;V 樣總:加入試劑一體積,1mL;T:催化反應時間(min), 2min。

使用96 孔板測定的計算公式如下

(1)按蛋白濃度計算

活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol AsA 為1U。

APX(U/mg prot) = (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×106÷(Cpr×V 樣)÷T

=3×(△A 測定管-△A 空白管) ÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

活性單位定義:每克樣品每分鐘氧化 1μmol AsA 為1U。

APX(U/g 鮮重) = (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反總×106÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T

=3×(△A 測定管-△A 空白管) ÷W

ε:AsA 在290m 處摩爾吸光系數為 2.8×103  L/mol/cm;d:96 孔板光徑(cm),0.6 cm;V 反總:反應體系總體積(L),200μL=2×10-4  L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA 蛋白質含量測定試劑盒;W :樣品質量,g;V 樣:加入反應體系中上清液體積(mL),20μL=0.02mL;V 樣總:加入試劑一體積,1mL;T:催化反應時間(min), 2min。



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