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產品名稱:堿性磷酸酶(AKP/ALP)測試盒

產品規格:50管/24樣,100管/48樣

產品貨號:YX-C-B002,YX-W-B002

產品報價:

免費咨詢:0551-66107970

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貨號

產品名稱

檢測方法

規格

售價(元)

YX-C-B002

堿性磷酸酶(AKP/ALP)測試盒

可見分光光度法

50/24

160

YX-W-B002

堿性磷酸酶(AKP/ALP)測試盒

微量法

100/48

300

堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測試劑盒說明書(微量法

注意:正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預測定。

規格:100T/48S

產品內容:

提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體 15mL×1 瓶,4℃避光保存,變成藍綠色不能使用。

標準品:液體 1mL×1 支,2μmol/mL 酚標準液,4℃保存。

產品說明:

AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。

AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。

在堿性環境中,AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與 4-氨基安替比林和鐵氰化鉀反應紅色亞醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通過測定 510 nm 吸光度增加速率,來計算 AKP 活性。

試驗中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>

稱取約 0.1g 組織,加提取液 1mL 充分研磨,4℃、10000rpm 離心 10min,取上清液待測。血液可直接用于測定,或者適當稀釋后用于測定。

二、測定步驟:

(1)分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上,調節波長到 510 nm,蒸餾水調零。

(2)試劑二置于 37℃水浴中預熱 30 min 以上。

試劑名稱(μL)

測定管

對照管

空白管

標準管

蒸餾水

-

-

4

-

2μmol/mL 標準品

-

-

-

4

上清液

4

-

-

-

試劑一

40

40

40

40

試劑二

40

40

40

40

混勻后置于 37℃水浴中保溫 15min

試劑三

120

120

120

120

上清液

-

4

-

-

混勻后于 510 nm 測定吸光度,分別記為 A 測定管、A 對照管、A 空白管、A 標準管。

三、AKP/ALP 活性計算:

(1)按蛋白濃度計算

活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。

AKP/ALP (U/mg prot)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣]÷(Cpr×V 樣)÷T

=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管) ÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘催化產生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。

AKP/ALP (U/g 鮮重)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣] ÷(W÷V 提取×V 樣)÷T

=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W

(3)按液體體積計算

活性單位定義:37℃中每毫升血液每分鐘催化產生 1μmol 酚為一個酶活力單位。

AKP/ALP (U/mL)= [C 標準品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)×V 樣] ÷V 樣÷T

=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)

      C 標準品:2μmol/mL;V 反總:反應體系總體積(mL),204μL=0.204mL; V 樣:加入反應體系中上清液體積mL),0.004mL;T:反應時間(min),15 min;V 提?。杭尤胩崛∫后w積,1mL; W:樣本鮮重,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL。

注意事項:

1、 試劑一、試劑二和試劑三均需避光保存。

2、 試劑三變藍綠色后不能再使用。

3、 加入試劑三后必須立即混勻,否則顯色不完全。



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