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產品名稱:脂蛋白酯酶(LPL)測試盒

產品規格:50管/24樣,100管/48樣

產品貨號:YX-C-B415,YX-W-B415

產品報價:

免費咨詢:0551-66107970

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貨號

產品名稱

檢測方法

規格

售價(元)

YX-C-B415

脂蛋白酯酶(LPL)測試盒

可見分光光度法

50管/24

400

YX-W-B415

脂蛋白酯酶(LPL)測試盒

微量法

100管/48

780

脂蛋白酯酶(LPL)活性檢測試劑盒說明書(可見分光光度法

注意: 正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

產品簡介:

脂蛋白酯酶(Lipoproteinlipase,LPL)是甘油三酯降解的降速酶,可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯,主要在肝臟實質細胞中合成,在脂質代謝和轉運中發揮重要作用。

脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕櫚酸酯產生 4-硝基苯酚,在 400nm 有特征吸收峰。

試驗中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、EP 管、冰、丙酮和蒸餾水。

產品內容:

試劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑×1 支,4℃避光保存。臨用前加入 1.5mL 丙酮溶解備用。

試劑三:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。

標準品:液體 1mL×1 支,5μmol/mL 對硝基苯酚標準溶液,4℃保存。

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>

1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):試劑一體積(mL) 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);10000g 4℃離心 10min, 取上清,置冰上待測。

2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入1mL 試劑一),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。

二、測定步驟:

1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 400nm,蒸餾水調零。

2、將 5μmol/mL 標準液用試劑一稀釋 16 倍至 0.3125 μmol/mL 的標準溶液備用。

3、操作表:在 1.5mL EP 管中進行下列操作:

樣品名稱

對照管

測定管

標準管

空白管

樣品(μL)

100

100

-

 

標準管(μL)

-

-

100

 

蒸餾水(μL)

-

-

-

100

試劑一(μL)

400

360

400

400

試劑二(μL)

-

40

-

-

混勻,45℃水浴 10min

-

-

試劑三(μL)

500

500

500

500

充分混勻放置 2min 后,對照管和測定管 8000g 常溫離心 10min,取上清、標準管和空白管于1mL 玻璃比色皿中測定 400nm 處吸光值,記為 A 對照管、A 測定管、A 空白管、A 標準管,△A=A

測定管- A 對照管,△A 標準=A 標準管- A 空白管。

LPL 活性計算

1、血清(漿)LPL 活力計算

單位定義:在 45℃,pH7.5 條件下,每毫升血清每分鐘水解產生 1nmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL(U/mL)=△A÷(△A 標準÷C 標準)÷T×1000=31.25×△A÷△A 標準。

2、組織、細菌或細胞中 LPL 活力計算

1. 按樣本鮮重計算

單位定義:在 45℃,pH7.5 條件下,每克組織每分鐘水解產生 1nmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL(U/g 鮮重)=△A÷(△A 標準÷C 標準)×V 提取÷W÷T×1000=31.25×△A÷△A 標準÷W。

2. 按樣本蛋白濃度計算

單位定義:在 45℃,pH7.5 條件下,每毫克蛋白每分鐘水解產生 1nmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL(U/mg prot)=△A÷(△A 標準÷C 標準)×V 提取÷(V 提取×Cpr)÷T×1000=31.25×△A÷△A 標準÷Cpr。

3. 按細菌或細胞密度計算:

單位定義:在 45℃,pH7.5 條件下,每 104 個細胞每分鐘水解產生 1nmol 4-硝基苯酚為一個酶活力單位。

LPL(U/104 cell)=△A÷(△A 標準÷C 標準)×V 提取÷500÷T×1000=0.0625×△A÷△A 標準。

C 標準:標準溶液濃度,0.3125μmol/mL;V 提?。杭尤朐噭┮惑w積,1 mL;T:反應時間,10min; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬;1000:單位換算系數,1μmol=1000nmol。

注意事項

1、 測定管加入試劑二后混變渾濁為正?,F象。

2、 若 A 大于 1,將粗酶液用試劑一稀釋后再進行測定。

3、 標準曲線線性范圍為 0.01 -0.625μmol/mL。



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