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產品名稱:維生素B6(Vitamin B6,VB6)測試盒

產品規格:50管/48樣,100管/96樣

產品貨號:YX-C-A521,YX-W-A521

產品報價:

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貨號

產品名稱

檢測方法

規格

售價(元)

YX-C-A521

維生素B6(Vitamin B6,VB6)測試盒

可見分光光度法

50/48

500

YX-W-A521

維生素B6(Vitamin B6,VB6)測試盒

微量法

100/96

980

維生素 B6 檢測試劑盒說明書(可見分光光度法

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

規格:50管/48樣

產品內容

提取液:液體 36mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 40mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑四:粉劑×1 瓶,4℃避光保存,臨用前加入 40mL 蒸餾水混勻,如果一次性用不完,可分 裝于-20℃保存待用。

標準品:粉劑×1 支,10mg 維生素 B6 ,4℃保存。臨用前加入 1mL 試劑一, 配成 10mg/mL(即 10000μg/mL)的標準液。

產品說明:

維生素 B6(Vitamin B6)又稱吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在體內以磷酸酯的形 式存在, 是一種水溶性維生素,肉類、全谷類、蔬菜和堅果類中含量較高。在機體中參與多種蛋白 質和氨基酸的代謝,對生物體具有極其重要的作用。

VB6 與 4-氨基安替比林在強氧化劑作用下生成穩定的黃色化合物,在 400nm 有特征吸收峰。

實驗所需的儀器和試劑:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、EP 管、蒸餾水。

操作步驟:

一、粗酶液提?。?/span>

1、組織: 將樣品磨碎,按照質量(g): 提取液體積(mL)為 1:5~ 10 的比例(建議稱取約 0. 1g ,加 入 0.6mL 提取液) 加入提取液,60℃浸提 30min ,加蒸餾水 0.4mL,混勻后于 25℃ ,16000rpm 離心 10min,取上清測定(動物組織及其他蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30 分鐘或反復離心 2-3 次至 上清無混濁)。

2、細胞: 按照細胞數量(104 個): 提取液體積(mL)為 500~ 1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加 入 0.6mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w ,超聲 3 秒, 間隔 7 秒, 總時間 3min);加蒸 餾水 0.4mL ,混勻后于 25℃ ,16000rpm 離心 10min ,取上清測定。

3、液體: 直接檢測。

二、測定步驟:

1 、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 400nm ,蒸餾水調零。

2 、將 10mg/mL( 10000μg/mL)標準液用試劑一稀釋為 125 、62.5 、31.25 、15.625 、7.8125μg/mL 標準溶液備用。

3 、操作表:  1.5ml 離心管中依次加入下列試劑:

 

樣品對照管

樣品測定管

標準管

空白管

空白對照管

樣品(μL)

200

200

-

-

-

試劑一(μL)

-

-

-

200

200

標準溶液

μg/mL)

-

-

200

-

-

試劑二(μL)

200

200

200

200

200

試劑三(μL)

300

300

300

300

300

試劑四(μL)

-

300

300

300

-

蒸餾水(μL)

300

-

-

 

300

充分混勻,25℃反應 20min,測定 400nm 處吸光值, 記為 A 樣品測定管和 A 樣品對照管、 A 空白管、 A 空白對照管,△A=(A 樣本測定管-A 樣本對照管) -(A 空白管- A 空白對照管)。 空白管、空白對照管只要做一管。

二、維生素 B6 含量計算:

1 、 標準曲線的繪制:

以各個標準溶液的濃度為 x 軸, 其對應的△A 標準為 y 軸, 繪制標準曲線, 得到標準方程 y=kx+b,△A 帶入方程得到 x(μg/mL)

2 、 維生素 B6 含量的計算:

1) 按蛋白濃度計算

VB6 μg/mg prot)= x×V 提取÷ V 提取×Crp)= x÷Cpr。

2) 按樣本質量計算

VB6 μg/g 鮮重) = x×V 提取÷W=x÷W。

3) 按照細胞數量計算

VB6 μg/104 cell)= x×V 提取÷細胞數量(萬個) =x÷細胞數量(萬個)

4) 按液體體積計算

VB6 μg/mL)= x×V 提取÷V 提取= x

V 提?。?/span> 提取液體積,1mL; V 樣: 加入的樣品體積,0.04mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。

注意事項:

1、A 大于 0.8 時,建議將樣品用試劑一稀釋后再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。

2、蛋白濃度較高的樣品,比如動物組織、豆類種子等,若顯色完成后有沉淀產生,將樣本稀釋后再 測定,在計算公式中乘以稀釋倍數。

3、顯色完成后立即進行測定,盡量保證反應時間一致。



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